吴一龙团队发现MET-TKI耐药新机制

广东省肺癌研究所吴一龙教授团队的李安娜、杨衿记和张绪超等新近发现，新的突变是MET抑制剂耐药的机制，这一研究于今年8月份在《Clinical Cancer Research》（IF=9.619）正式发表，这是目前为止第一篇关于MET抑制剂INC280耐药的研究，两个MET突变新位点是Y1248H 和 D1246N，体外试验进一步证实了I型、II型MET抑制剂对其的不同作用。提出了一种针对多个MET-TKI耐药机制的新观点，并强调了序贯使用I型、II型MET-TKI的潜在临床价值


50%的EGFR-TKI耐药机制是因产生T790M突变，而20%是MET扩增。由广东省肺癌研究所牵头的正在进行中的INC280临床研究，对EGFR-TKI耐药后的患者，INC280联合吉非替尼，初步有效率达到31% (28/90 例)。2017年ACCR一项研究结果表明对于EGFR-TKI耐药后出现MET过表达或激活，单药MET抑制剂无法发挥较好疗效，与INC280研究的初步结果不谋而合。
然而，EGFR-TKI耐药后使用MET-TKI也难逃耐药魔咒，2016年12月在Cancer Discovery报道了一例对克唑替尼耐药后出现D1228V位点突变的患者，2017年1月JTO报道的针对MET exon 14 突变使用克唑替尼耐药发现Y1230C位点突变。
本研究为探索MET-TKI耐药机制，采用NGS方法对治疗基线与进程中的组织与血液样本进行多节点动态监控。

12例晚期NSCLC患者均检测出EGFR敏感突变（7例EGFR 19 del; 5例EGFR 21 L858R），口服吉非替尼耐药后，IHC检测均为MET阳性（≥50%++），其中9例MET-FISH阳性，6例NGS示 MET扩增。

11例患者接受吉非替尼联合INC280，1例患者接受吉非替尼联合克唑替尼治疗，7例患者获得部分缓解(PR)；2例疾病稳定(SD)，3 例疾病进展 (PD)。
、12例患者在MET-TKI使用前均检测为IHC阳性，7例PR患者有5例NGS结果示MET扩增，5例SD/PD患者中仅有1例MET扩增，提示在5例SD/PD患者中尚存在其他耐药机制，同时我们看到使用NGS检测MET扩增是更好的预测方法。
7例PR患者中有5例基线期有EGFR L858R突变，5例SD/PD患者均为EGFR 19缺失，说明基线期EGFR L858R突变的患者对吉非替尼联合MET-TKI可能有更好的应答（P=0.028）。
2、MET-TKI使用前NGS检测到5例T790M突变，其中3例患者为SD/PD，而7例PR中有6例T790M阴性，5例SD/PD患者仅有1例T790M阴性，说明T790M突变可能是MET-TKI原发耐药的机制之一(P=0.088)，因此，如果同时有MET扩增和T790M突变，患者对吉非替尼联合MET-TKI应答较差，理论上MET-TKI 联合AZD9291或者能使患者获得临床获益。
3、2例患者在MET-TKI进展后的血液和组织样本中发现MET Y1248H和D1246N新位点突变：
Patient 02，32岁女性患者，多线治疗后，吉非替尼联合克唑替尼最好疗效PR，PFS=8.8m，进展后血液和肿瘤组织的NGS结果均显示MET D1246N点突变，MET Y1248H仅在血液NGS检测结果中出现。因一次活检不足可导致无法呈现耐药机制的全景，而基于NGS技术的ctDNA液体活检可展现出肿瘤基因的突变谱全貌，为临床医生提供更多有价值的信息
Patient 04，63岁女性患者，吉非替尼联合INC280最好疗效PR，PFS=7.2m,进展后血液和肿瘤组织的NGS结果均显示MET Y1248H点突变。
MET-TKI进展后，除了以上2例患者出现MET Y1248H和D1246N点突变，4例PR患者NGS结果示EGFR拷贝数扩增，表明在MET-TKI耐药机制中， EGFR拷贝数扩增可能是另一个耐药机制。


4、细胞及动物实验探究两个新突变位点的下游信号机制：
构建转染MET Y1228H 或 MET D1226N 的NIH3T3 细胞系，通过 INC280 和克唑替尼对细胞的杀伤作用并检测下游蛋白的表达，发现表达MET Y1228H 或 MET D1226N 的NIH3T3细胞株，均对INC280 和克唑替尼表现耐药； INC280 和克唑替尼作用转染MET Y1228H 或 MET D1226N突变的细胞株的蛋白发现，p-MET、p-Akt、p-Erk、p-S6k等下游磷酸化蛋白均没有变化。而II型MET抑制剂卡博替尼（XL184）则能恢复对通路下游磷酸化蛋白的抑制。动物试验中同样发现，具有这两种突变的小鼠成瘤不能被INC280和克唑替尼抑制，但XL184可抑制成瘤，提示出现这两种耐药突变时可以开始考虑使用卡博替尼。


5、构建2D及3D模拟分子结构模型，解释以上2个位点耐药及卡博替尼克服耐药的可能原因，从结构上可以发现I型MET抑制剂结合位点在突变位点附近，发生突变后导致结构改变因此影响与药物的结合；而II型MET抑制剂XL184的结合位点远离突变位点，因此不受突变的影响，从而不产生耐药。

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