【文献解读】靶向肿瘤KRAS突变的过继性T细胞治疗

T-CellTransfer Therapy Targeting Mutant KRAS in Cancer

NEnglJ Med, Dec 8, 2016;375:2255-62. IF: 59.558

摘要

本研究从转移性结直肠癌患者的肿瘤浸润淋巴细胞（tumor-infiltratinglymphocytes，TILs）中，分离得到对KRAS G12D突变产生响应的CD8+T细胞多克隆。该CD8+T细胞多克隆包含有4种靶向KRAS G12D突变的T细胞亚型，全部具有HLA-C*08:02限制性，将1.11×1011个此种T细胞回输后，患者体内7个肺部转移灶全部发生消退。但是，其中一个转移灶在治疗后9个月进展，实施了手术切除；经全外显子和转录组测序发现该转移灶6号染色体发生单倍体缺失，正是编码HLA-C*08:02型 MHC I类分子的区域。 而HLA-C*08:02型MHC I类分子的缺失，为肿瘤免疫逃逸提供了一条直接的途径。总结：对于表达KRAS G12D突变和HLA-C*08:02的肿瘤，回输靶向突变型KRAS的CD8+ T细胞可以有效地治疗肿瘤。

亮点

从TILs中分离得到特异性地靶向KRAS G12D突变的CD8+ T细胞多克隆，并利用TCR免疫组库技术对效应T细胞克隆的进行监测和追踪。

意义

首次靶向KRAS突变、成功地实施过继性细胞转移治疗，并取得很好的疗效，使得无药可用的KRAS突变有药可救。

背景

1.过继性细胞治疗在临床应用的前景很好，其中最为关键的是T细胞能否响应肿瘤突变产生的新抗原决定表位（neoepitope），决定了患者免疫能否从细胞免疫治疗（甚至免疫检查点抑制剂治疗）中受益。

2.KRAS突变：癌基因KRAS的突变频率很高，并且发挥促进肿瘤发生发展的作用；其中大部分是热点驱动突变，如12、13、61号密码子，12号密码子突变频率最高，为G到D的转变，称之为KRAS G12D。KRAS G12D是消化道肿瘤中最高频的突变，约45%的胰腺癌和13%的结直肠癌中存在。
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3.经数十年的研究，目前仍然没有药物或疫苗能够有效地靶向人类KRAS突变。

Case report

患者：

50岁，女性，转移性结直肠癌

治疗方案：

•细胞回输前，接受非清髓性淋巴细胞清除化疗方案：环磷酰胺60mg/kg体重，2天；随后氟达拉滨25mg/m2体表面积，5天。

•患者接受单次回输1.48×1011 个体外扩增的TILs，其中包含约75% CD8+T细胞1.11×1011 个对KRAS G12D突变有响应，未检测到对患者其它突变的响应。该细胞制品的主体产生多种效应细胞因子（INFγ、TNF、IL-2），并表现出细胞杀伤能力（图A）。

•细胞回输治疗后，患者接受5次的IL-2输入 (720,000IU/kg体重)。

治疗效果：治疗后40天第1次随访时，7个肺转移灶均消退；维持9个月部分有效（PR）后，有1个转移灶发生进展（lesion 3）；经手术切除，患者目前已持续4个月临床无病状态。

细胞制备——分离TILs中识别KRAS突变的T细胞

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鉴定出对KRAS G12D响应的TILs——TIL#6，将其在体外扩增2周后，用于回输治疗。

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TCR组库检测——体内追踪KRAS突变特异性T细胞克隆

1. 从扩增前的TIL #6中，分离出占主体地位的KRAS G12D特异性T细胞克隆——TRBV5-6（A）克隆。

2.从回输后40天的患者外周血中，分离出2种的KRAS G12D特异性T细胞克隆——TRBV5-6（B）和TRBV5-6（C） 。

3.从TIL #5中，分离出另一个KRAS G12D特异性T细胞克隆——TRBV10-2克隆

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